Electroforeza proteinelor serice cu imunofixare

Imunofixarea serica permite identificarea benzilor monoclonale detectate prin electroforeza. Realizarea in paralel, pe acelasi gel, a electroforezei proteinelor serice si a imunofixarii permite o comparatie directa intre anomaliile observate pe proteinograma si benzile monoclonate detectate pe imunofixarea cu antiser monospecific (anti lant greu alfa, gama, mu, si anti lant usor kappa si lambda).

Recomandari pentru efectuarea testului de imunofixare serica- evaluarea componentelor monoclonale depistate la electroforeza proteinelor serice, colagenozelor, a disgamaglobulinemii, evaluarea amiloidozei, a bolilor limfoproliferative.

Principiul testului: Imunofixarea este o tehnica ce marcheaza proteinele ramase libere, dupa procesul electroforetic, utilizand complexe cu anticorpi.  Prelucrarea se face in patru etape:

Separarea proteinelor prin electroforeza pe gel de agaroza;

Imunofixare (imunoprecipitare) a proteinelor – migrarea se face pentru fiecare antiser specific in parte. Antiserul difuzeaza in gel si precipita antigenul corespunzator.

Solutia in exces se va absorbi de pe gel si apoi se va spala gelul. Precipitatul atigen-anticorp ramane fixat pe gel;

Precipitatul de proteine este vizualizat prin colorare.

Pentru a detecta componentele monoclonale suspecte, probele sunt procesate simultan pe sase piste.dupa procesul electroforetic, electroforeza de referinta este etalonul pentru electroforezele lucrate ulterior.

Conditii de recoltare:

Recoltarea se face dimineata pe nemancate. Se recolteaza sange venos, in vacutainer fara anticoagulant, cu/fara clot activator, cu/fara gel separator ( vacutainer cu dop rosu sau galben), atat cat permite vacuumul.

Dupa recoltare : se separă serul prin centrifugare la 4000 turatii, timp de 5 minute. Se recomanda utilizarea serului proaspat pentru analiza. Serul se pastreaza la 2-8ºC cat mai repede posibil dupa ce a fost recoltat, pentru maximum o saptamana.

Probe de evitat:

Probele de plasma. Fibrinogenul poate da o banda care poate fi confundata cu una monoclonala, foarte aproape de punctul de aplicare al probei.

Probele depozitate timp indelungat, pastrate impropriu.

Specimenele recoltate care prezinta hemoliza puternica sau care sunt recoltate necorespunzator, in alte tipuri de vacutainere, vor fi respinse de la  testare

Interpretare :

         Profilul electroforetic normal corespunde absentei oricarei benzi pe pistele G, A, M, K, L (unde apar numai componente policlonale G, A, M, K si L) si pe electroforeza proteinelor serice martor. Hipergamaglobulinemia se caracterizeaza printr-o zona gama colorata intens si difuz, fara alte forme asemanatoare cu o banda monoclonala. Probele de ser  normale nu contin componenta monoclonala.

Prezenta componentului monoclonal - prezenta unei proteine monoclonale (gamapatie) este caracterizata printr-o banda monoclonala detectata cu un antiser si facuta comparativ cu o migrare de referinta

Prezenta unuia sau a mai multor componenti monoclonali – in cazuri foarte rare, clone ale celulelor - B proliferative indicate printr-o banda pusa in evident prin imunofixare:

O gamapatie biclonala este caracterizata prin prezenta a doua benzi a lanturilor grele sau doua benzi a lanturilor usoare identice sau diferite.

O gamapatie oligoclonala se caracterizeaza prin prezenta multiplelor benzi cu una sau mai multe tipuri de lanturi grele sau una sau mai multe tipuri de lanturi usoare.

Cazuri speciale:

Aparitia unei benzi monoclonale pe electroforeza proteinelor serice martor, neconfirmata, insa prin imunofixare, indica prezenta fibrinogenului.

Aparitia unei benzi monoclonale pe toate pistele indica prezenta criglobulinelor sau a unei IgM polimerizate.